細胞劃痕實驗的所需材料、實驗步驟

所需材料
1、儀器：細胞計數儀、臺式離心機、CO2培養箱、倒置顯微鏡、移液槍、移液管移液器、4℃和-20℃冰箱、6孔培養板、直尺、maker筆。
2、試劑：細胞適配培養基、FBS、PBS、胰酶、樣本溶劑。
實驗步驟
1、劃線：先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔，每孔至少穿過5條線；
2、鋪板：處于對數生長期的細胞，胰蛋白酶消化成單細胞懸液，接種于6孔培養板；細胞鋪板6w/孔，接種原則為過夜后融合率達到100%，每孔最終的培養基總量2mL；
3、細胞培養37℃、5％CO2培養箱中培養24h；
4、劃痕：第二天用200微升槍頭比著6孔板蓋子或直尺，平行或垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜；
5、清洗：PBS沖洗細胞3次，除去劃下的細胞，加入無血清培養基；
6、拍照：擦去6孔板背后的marker橫線劃痕。4倍鏡下進行拍照，保證劃痕居中且垂直，注意背景一致，加入待測樣本，設置濃度梯度，可按0，6，12，24h時間點取樣，拍照。
7、結果分析，使用Image J軟件打開圖片后，隨機劃取6至8條水平線，計算細胞間距離的均值或者劃痕面積均值。
8、數據處理：
細胞遷移率(傷口愈合率)=(初始劃痕面積-t時刻劃痕面積)/初始劃痕面積
細胞遷移率(傷口愈合率)=(初始細胞間距離均值-t時刻細胞間距離均值)/初始細胞間距離均值

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