當貼壁細胞生長鋪滿培養容器后將無法繼續生長,同時細胞活性會受到抑制,因此需要在其長滿前進行消化傳代操作,一般使用胰蛋白酶消化法進行,胰酶可水解消化細胞的貼壁連接蛋白,使細胞從壁上脫落。懸浮細胞因其不貼壁,可直接分瓶傳代。
操作方法:
①使用PBS清洗細胞2次;
②加入胰蛋白酶,37℃孵育一定時間;
③待細胞收縮成圓形或成片脫落后,加入完全培養基終止消化,將細胞吹下并轉移至離心管;
④離心后棄去上清液,使用新鮮的完全培養基重懸細胞,分裝接種至培養器皿。
注意事項:細胞消化時間應根據不同細胞特性進行調整,消化時間不可過長,消化過久會對細胞造成較大損傷,降低存活率,影響細胞形態,同時也不可在消化不足的情況下強行將細胞吹下,這同樣會對細胞造成損傷。
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