瓊脂糖凝膠配置

一、原理

DNA在堿性的溶液中帶有負電荷，因此，在電場作用下朝正極移動。

在瓊脂糖凝膠中電泳時，由于瓊脂糖凝膠具有一定孔徑，長度不同的DNA分子由于所受凝膠的阻遏作用大小不一，遷移的速度不同，從而可以按照分子量大小得到有效分離。

溴化乙錠可插入到DNA分子的雙鏈中，在紫外光的照射下，插入溴化乙錠的DNA呈橙紅色熒光，所以溴化乙錠可以作熒光指示劑指示DNA含量和位置。

二、材料、儀器設備及試劑

1）材料：分子量不同的DNA片段。

2）儀器設備：

1. 電泳儀；

2. 紫外檢測儀；

3. 水平電泳槽；

4. 移液器；

5. 一次性手套。

3）試劑：

1. pH8.3 Tris-硼酸-EDTA緩沖液：稱取10.78gTris，5.500g硼酸，0.930gEDTA-Na2溶于無離子水，定容到100ml，用時稀釋10倍；

2. EB溶液：溴化乙錠（10mg/ml）（用時稀釋10倍）；

3. 加樣緩沖液：50%甘油+0.25%溴酚藍；4. 瓊脂糖。

三、實驗步驟

1）瓊脂糖凝膠的制備：

1. 稱取瓊脂糖1g，加入10倍電泳緩沖液10ml，再加入蒸餾水90ml，在電爐上加熱溶解，配制成1%瓊脂糖凝膠；

稍涼后加入配好的EB溶液數滴。

2. 將電泳模板兩端密封，倒入瓊脂糖凝膠溶液，插入梳子。

3. 冷凝后將梳子撥出，電泳膠放入電泳槽中。

2）加樣：

取樣品溶液20μl，加入1/5體積加樣緩沖液，混勻后，將溶液加到樣品孔中，同時在另一樣品孔中加入標準分子量DNA。

一般DNA樣品最好控制在0.5～1.0μg之間。

3）電泳：加入pH8.3Tris-硼酸-EDTA緩沖液，通電維持2～4V/cm，電泳至溴酚藍走到膠底部邊緣時停止電泳。

4）染色及觀察：電泳完畢，取出凝膠模具，將其推到一塊干凈的玻璃板上，于254nm或300nm波長紫外燈下觀察，DNA存在的位置呈現橙黃色熒光，放置時間超過4～6h后熒光減弱，因此應立即用用國產全色膠卷拍照，并應加上紅色濾色鏡。

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