ACK紅細胞裂解液的原理及使用

原理：氯化銨是紅細胞裂解液的主要效應物質，氨根離子不能通過細胞膜，而其他離子可以通過，造成細胞內外的離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會擴散至細胞內，使紅細胞膨脹，達到裂解的效果。

使用說明：

組織細胞樣品：

1.新鮮組織經胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液，離心棄去上清液；

2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液），輕輕吹打混勻；

3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；

4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次；

5.如裂解不完全可重復步驟2和3；

6.重懸細胞，用于后續實驗；如提取RNA，最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液中進行。

血細胞：

1.新鮮抗凝血，離心棄去上清液；

2.取出4℃冰箱預冷的ELS裂解液，按1:6-10的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細胞壓積加入6-10ml裂解液），輕輕吹打混勻；

3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；

4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次；

5.如裂解不完全可重復步驟2和3；

6.重懸細胞，用于后續實驗；如提取RNA，最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進行。

*以上內容來自網絡