ELISA實驗的這些技巧

1.標準品的稀釋，請按照說明書進行操作。

2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加樣：不規范的移液操作可能帶來誤差。

1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗NE抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；

2）標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；

3）待測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗NE抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

8. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后10分鐘以內進行。

9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。