CCK-8細胞實驗原理及步驟

實驗原理
CCK8全稱Cell Counting Kit-8試劑，可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。
其基本原理為：該試劑中含有水溶性的四唑鹽WST-8，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物。
生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比，因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
實驗步驟
DAY 1
1、對前一天培養好的細胞消化、離心、計數。
2、在96孔板上接種100μL 3k-7k/孔的細胞，在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養24小時。
DAY 2
1、在顯微鏡下觀察細胞生長狀態和密度，取生長狀態良好，細胞分布及密度均一的孔進行實驗。
2、配制不同濃度梯度的樣本溶液，如300、100、33.3、11.1、3.7、1.2、0.4、0.14uM。每個濃度三個復孔加入到96孔板中，在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養適當時間長度。如6，12，24或48小時。
DAY 3/4
1、CCK8使用前在室溫下解凍并離心。
2、用倒置顯微鏡檢測細胞生長狀態，并用4X/10X取生長狀態良好，細胞分布及密度均一的孔拍照記錄。
3、在每孔中加入10μL的CCK-8溶液。
4、在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養0.5-4小時。
5、用酶標儀在450 nm處測量吸光度。
6、用Excel及Graphpad Prism處理并分析結果。