IMDM液體培養(yǎng)基的應(yīng)用

在表達狂犬抗體的CHO細胞無血清懸浮培養(yǎng)方法中的應(yīng)用：

表達狂犬抗體的CHO細胞無血清懸浮培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
1、細胞株的培養(yǎng)：所述細胞株為中國倉鼠卵巢細胞，且以下簡稱為細胞；
將細胞以2*105—6*105cells/ml的數(shù)量接種于血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為37℃，5%二氧化碳的培養(yǎng)箱，得到細胞A；
測定細胞A的生長曲線以及加入微量的促生長因子后得到細胞A的生長曲線；
所述促生長因子為促生長劑G-CSF-RCHP，且按0.2—0.4μl/ml添加至血清培養(yǎng)基。
2、細胞的收集：將生長于血清培養(yǎng)基中的細胞A使用胰酶處理1—5分鐘后，收集細胞A于15ml的離心管中，1000rpm離心3分鐘，吸入37℃預(yù)熱的10ml無血清培養(yǎng)基溶液洗滌細胞一次，最終定容于體積5ml的無血清培養(yǎng)基中得到細胞B，并采用Trypan Blue染色計數(shù)細胞B，測定細胞B的數(shù)量。
3、6孔板的預(yù)處理：取PH值為7.0—7.2的1XBS溶液，稀釋濃度為1mg/ml的纖維鏈接蛋白，得到最終工作濃度為20—80μl/ml的混合溶液，再吸取1ml混合溶液加入6孔板，處理時間為15—60分鐘，即得到預(yù)處理6孔板。
4、細胞培養(yǎng)：將細胞B按2x10的5次方—6x10的5次方cells/ml的數(shù)量接種預(yù)處理6孔板中，再將細胞B依次在含有5%、2.5%、1.25%、0.1%胎牛血清的IMDM液體培養(yǎng)基中逐漸代替培養(yǎng)，當細胞B充滿貼壁成長或經(jīng)隔夜培養(yǎng)生長后即可替換為上述胎牛血清比例逐步減少的IMDM液體培養(yǎng)基，直至替換為無血清培養(yǎng)基；
同時通過顯微鏡觀察經(jīng)過隔夜培養(yǎng)的細胞B的形態(tài)，并根據(jù)細胞B生長的情況，當細胞B由貼壁生長逐漸轉(zhuǎn)換為懸浮生長，且細胞形態(tài)由弧形或梭形轉(zhuǎn)換為圓形，將懸浮的細胞B轉(zhuǎn)接未經(jīng)預(yù)處理的6孔板繼續(xù)培養(yǎng)，最終從生長的細胞B中篩選懸浮細胞，并對篩選出的懸浮細胞抗體進行檢測。

*以上內(nèi)容來自網(wǎng)絡(luò)