一、保存溫度和條件
很多抗體的最佳保存條件是分裝成小包裝凍存于-20°C或-80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小,同時可避免多次在一個管內取樣而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體,融解一次后剩余抗體應保存于4°C。收到抗體后,應10,000 x g 離心20秒,使管口螺紋內的抗體溶液全部離心至管底,用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗的使用量。分裝量不能少于10μl;分裝量越少,由于蒸發和吸附于管內壁而引起的損失會越大。
除了腹水液含蛋白酶應立即凍存外,大多數抗體接收后可在4°C保存一至兩周,隨后可凍存以長期保存。同樣,應按照說明書推薦的條件進行保存。
二、特殊情況
1、酶聯抗體,不應凍存,4°C可保證穩定。凍融會降低酶的活性,同時影響抗體的吸附能力。
2、偶聯標記的抗體,無論是標記的熒光染料、酶還是生物素,都應保存于深色的管內并包裹上鋁箔。如果暴露在光線下可能會減弱偶聯標記物的活性。熒光標記物尤其容易受到光漂白作用,整個實驗過程中均應避光。
3、免疫球蛋白G3同種型抗體凍融后易形成聚合物,因此應一直保存于4°C。
4、用疊氮化鈉防止污染
為防止微生物污染,在抗體溶液中應加入疊氮化鈉,終濃度為0.02%(質量百分比)。
5、什么時候不能用疊氮化鈉
如果用抗體標記活細胞,或用于體內實驗,確保所用制劑中不含疊氮化鈉。這種抗生素對大多數有機體都有毒性:會阻斷細胞色素電子傳遞系統的信號。
疊氮化鈉會干擾胺基的偶聯標記,應在進行標記之前將其除去。標記后抗體可保存于疊氮化鈉,也可用不含胺基的硫柳汞替代。疊氮化鈉可用透析或凝膠過濾法從抗體溶液中除去。免疫球蛋白 G的分子量是150,000 kDa(免疫球蛋白M的分子量是600,000 kDa),疊氮化鈉的分子量是65道爾頓。使用14,000 kDa的微量透析裝置,隨著疊氮化鈉的擴散,抗體將保留。將帶有燒杯的磁力攪拌器置于4°C攪拌透析裝置6小時 , 每毫升抗體溶液要用至少1升的磷酸鹽緩沖液。更換2次磷酸鹽緩沖液,每次均攪拌至少6小時。如果可以的話,所有材料均要求無菌,所有溶液都應無菌配制。
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