一、透析的原理
透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質在膜內外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
二、透析袋使用前的處理
為防干裂,出廠前透析袋一般都經10%的甘油處理,透析袋中含有微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質,它們對蛋白質和其他生物活性物質有害,用前必須除去。新購進的普通型透析袋必須經過處理才能使用。處理方法如下。
1.把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段。
2.在大體積(500ml)的2%(w/v)的碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中將透析袋煮沸10min。
3.用蒸餾水徹底清洗透析袋。
4.放在500ml的1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中將之煮沸10min。
5.冷卻后,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內,從此時其取用透析袋必須戴手套。
6.在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗干凈。
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