木聚糖酶活性測定方法分享

木聚糖是一種存在于植物細胞壁中的多糖類物質，是植物半纖維素的主要成分。

木聚糖酶分布廣泛，可以從動物、植物及微生物體內獲得。

檢測原理：

木聚糖酶可以將底物木聚糖降解為寡糖和單糖，具有還原性的寡糖和單糖在沸水浴的條件下，能夠和DNS試劑發生顯色反應。

通過反應溶液的顏色的變化，來確定還原糖的含量。

因為還原糖的生成量和反應液的木聚糖活力是成正比的，通過分光光度法可以測定，計算出樣品中的木聚糖酶活力。

檢測所用的試劑：

乙酸溶液、乙酸鈉溶液、氫氧化鈉溶液、乙酸-乙酸鈉緩沖溶液、木糖溶液、木聚糖溶液、DNS試劑。

所需要的儀器設備：

碾缽、分樣篩、分析天平、pH計、磁力攪拌器、電磁振蕩器、離心機、恒溫水浴鍋、分光光度計等。

標準曲線：

吸取乙酸-乙酸鈉緩沖溶液4ml，加入DNS試劑5ml，沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，用水定容至25ml，制成標準空白樣。

分別吸取木糖溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，加入緩沖溶液定容至100ml，配制成0.1-0.7mg/ml的木糖標準溶液。

按照上述的標準溶液配制，分別做2次平行。吸取木糖標準溶液2ml，分別加入2ml水和5mlDNS試劑。

電磁振蕩3s，沸水加熱5min，用自來水冷卻至室溫，用水定容至25ml。

以標準空白樣作為對照，在540nm處測吸光度OD值。

以木糖濃度為Y軸，吸光度OD值為X軸，繪制標準曲線。

檢測過程：

吸取10ml木聚糖溶液，37℃平衡10min。

吸取10ml經過稀釋的木聚糖酶溶液，37℃平衡10min。吸取2ml平衡過的木聚糖酶液，加入5mlDNS試劑，電磁振蕩3s。

加入2ml木聚糖溶液，37℃保溫30min。沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，加水定容至25ml，電磁振蕩3s。

以標準空白樣為空白對照，在540nm處測定吸光度。以同樣的方法，加入2ml的木聚糖酶，電磁振蕩3s，37℃精確保溫30min，加入5mlDNS試劑，電磁震蕩3s，以終止酶解反應。

沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，加水定容至25ml，振蕩3s，以標準空白樣為空白對照，在540nm處測定吸光度。

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