1.種板數:根據你需要的種板濃度,根據種板濃度對細胞懸液進行稀釋,通常細胞增殖實驗每孔加入約1000-2000個細胞100ul,細胞毒性實驗每孔加入約5000~10000個細胞100ul(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。
2.種板:以96孔板為例,96孔板橫向是1-12的數字,縱向是A-H,可做多個實驗組,每組設置4-6個復孔,同時設置空白組,最邊緣孔加入PBS緩沖液減少蒸發帶來的影響,然后將細胞置于37℃ 5%CO2細胞培養箱中培養12-24 h。
3.加藥及加藥后孵育時間:觀察細胞細胞貼壁良好,吸出各孔培養基,實驗組加入含不同濃度藥物的培養基,空白組加入不含藥物培養基,然后將96孔板在37℃ 5% CO2空氣的細胞培養箱中孵育適當時間,根據不同實驗細胞需求選擇適當的孵育條件和時間。
4.加入CCK-8:兩種方法,每孔直接加入10ul的CCK-8溶液,或者配置成含10%CCK-8溶液的培養基以換液的形式加入,注意加入過程中避免產生氣泡,可以將槍頭浸入培養液中緩慢加入。
5.加入CCK-8后孵育時間:將加完CCK-8的培養板放入37°C 5%CO2 培養箱中孵育1-4h,CCK-8試劑加入后孵育時間也需要自己摸索,隨著時間的增加,OD值就會增大。可以在0.5h、1.0h、2.0h分別測OD值,把OD值控制在1.0左右。
6.測OD值:將96孔板取出,酶標儀檢測各孔在450nm波長處的OD值,分析處理數據,繪制增殖曲線。
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