免疫細(xì)胞的分離

免疫細(xì)胞（immune cell）俗稱白細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和各種吞噬細(xì)胞等，也特指能識(shí)別抗原、產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的淋巴細(xì)胞等。淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的基本成分，在體內(nèi)分布很廣泛。除淋巴細(xì)胞外，參與免疫應(yīng)答的細(xì)胞還有漿細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞及單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞。

免疫細(xì)胞分離方法：

1.根據(jù)細(xì)胞屬性（如粘附）和功能不同進(jìn)行細(xì)胞分離：粘附分離法、尼龍毛柱分離法、羰基鐵分離法等。

2.根據(jù)細(xì)胞的大小及比重的差異進(jìn)行細(xì)胞分離：葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法和Percoll 不連續(xù)密度梯度離心法等。

3.利用細(xì)胞表面標(biāo)志進(jìn)行細(xì)胞分離：E 花環(huán)沉淀分離技術(shù)、免疫磁珠法分離、流式細(xì)胞術(shù)分離法、補(bǔ)體細(xì)胞毒分離法，洗淘分離法（panning）。

其中外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離和免疫磁珠分離細(xì)胞是最常見的免疫細(xì)胞分離方法。

外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離

原理

外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的分離是免疫學(xué)研究中的一項(xiàng)基本技術(shù)。目前國內(nèi)外分離 PBMC 的常用方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法。用此方法分離 PBMC 純度可達(dá)95％，淋巴細(xì)胞約占 90％，其中 T 淋巴細(xì)胞占 80％，B 淋巴細(xì)胞占 4～10％。下圖紅色方框內(nèi)即為PBMC。

注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)所用玻璃器皿應(yīng)該潔凈。如果制備的單個(gè)核細(xì)胞懸液用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，上述操作過程都要在無菌條件下進(jìn)行，所用器材、試劑都應(yīng)為無菌。

2.實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞得率與室溫及分層液比重等有關(guān)。分層液應(yīng)避光 4℃保存。

3.不同屬的PBMC所需的分離液都不同，在分離人 PBMC 時(shí)，要求其比重為 1.077；分離小鼠單個(gè)核細(xì)胞時(shí)比重為 1.080；分離大鼠單個(gè)核細(xì)胞時(shí)比重為 1.084～1.087；分離馬單個(gè)核細(xì)胞時(shí)比重為 1.090。

4.往淋巴細(xì)胞分層液中加入稀釋全血時(shí)，不得將血液沖入分離液中，須保持兩層液體的清晰界面

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