作為ELISA實驗的最后一步,檢測結果的計算對整個實驗十分重要。
我們以夾心法為例,來介紹ELISA實驗結果計算。
● ELISA的樣本通常要設置1~2個復孔進行檢測,分別求出標準品、實驗組樣本吸光度的平均值。單個樣本的檢測值不應超出平均值的20%;
● 樣本的OD(吸光度)平均值要減去標準品濃度為0時的OD平均值;
● 建立標準曲線:在對數坐標圖上擬合四參數的邏輯函數曲線(X軸上為標準品濃度,Y軸為對應的OD值)
詳細步驟如下:
第一步:輸入標準品濃度和OD值
第二步:選擇擬合曲線類型——非線性曲線擬合
選中輸入的數值框,按如下操作依次點擊選項。
第三步:選擇Statistics和Logistic,勾選“Find X from Y”
完成上述操作后,點擊Fit按鍵,擬合曲線和相關信息將自動生成。
第四步:查看標準曲線信息(如參數值,R-Square等)
第五步:修改橫縱坐標標題,設置坐標軸類型為對數
雙擊第四步中的擬合曲線圖,對其進行編輯。雙擊修改橫縱坐標的標題,雙擊X軸、Y軸,設置坐標類型為“Log10”,并設置橫縱坐標范圍。
第六步:根據標準曲線計算樣品濃度
選擇第四個工作表(Fit NL Find X from Y1),在左列輸入樣本的OD值,對應的濃度將在右列自動生成。
注意:
如果樣本的OD值超出標準曲線的上限,請在實驗前適當稀釋樣本,以獲得精確結果。分析數據時,樣本實際濃度應為標準曲線上獲得的濃度乘以稀釋倍數。
*以上內容來自網絡
友情鏈接:
上海聯碩官網