ELISA實驗原理

酶聯免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術，由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年首次描述。該測定依賴于抗原-抗體相互作用的原理，并利用酶和比色檢測來量化目標分子，主要用于檢測和量化生物樣品中特定蛋白質、肽、抗體或抗原的存在。ELISA測定通常應用于各個領域，包括臨床診斷、藥物研究和生命科學基礎研究。

在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種：

直接ELISA：抗原通過一段時間的孵育被動地附著在塑料固相載體上，經過簡單的洗滌后，通過添加與酶共價連接的抗體來檢測抗原。孵育和洗滌后，通過添加色原/底物使酶活性產生顏色變化來顯色。在規定的時間后通過化學手段終止酶活性后讀取顯色情況。在分光光度計中讀取顏色。該方法相對簡單，但它在靈敏度方面可能存在局限性，特別是當抗體-抗原相互作用相對較弱時。

間接ELISA：間接ELISA是在直接ELISA的基礎上添加酶標二抗進行檢測?？乖ㄟ^孵育被動附著到孔上，洗滌后，將抗原特異性抗體（一抗）與抗原一起孵育。 清洗孔并通過添加與酶共價連接的抗物種抗體（二抗）來檢測結合的抗體。二抗對于產生所添加的第一抗體的物種具有特異性。