ELISA檢測(cè)試劑盒有哪些免疫測(cè)定?

發(fā)布日期:2024-02-18 17:32:06   瀏覽量 :283
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ELISA檢測(cè)試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行發(fā)作氣泡。

加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,避免發(fā)作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定(如間接法 ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其中參加血清標(biāo)本,然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以保 證混和。加酶結(jié)合物使用液和底物使用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液進(jìn)程迅速完結(jié)。

在ELISA檢測(cè)試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需要有一定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。

ELISA屬固相,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標(biāo)本,其中的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī),只要貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)分散,才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號(hào)抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這便是為什么ELISA反響總是需要一定時(shí)刻的溫育。

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在建立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí),試驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),ELISA檢測(cè)試劑盒產(chǎn)物的生成可達(dá)高峰。為加速反響,可進(jìn)步反響的溫度。

有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為完全,在放射免疫測(cè)定中多使反響在冰箱中,以構(gòu)成多的沉積。但因所需時(shí)刻太長,在ELISA中一般不予采用。

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