一、實驗操作
直接ELISA是將特異性抗體直接固定在固相載體上,待測樣本中的抗原在洗滌過程中與抗體結(jié)合,再與酶標記的二抗結(jié)合,最后通過底物顯色反應檢測抗原。
在該過程中,抗體既可以與固相載體結(jié)合,也可以與抗原結(jié)合,因此被稱為“直接”ELISA。
間接ELISA是將特異性抗體與酶標記的二抗結(jié)合,待測樣本中的抗原在洗滌過程中與抗體結(jié)合,再與酶標記的二抗結(jié)合,最后通過底物顯色反應檢測抗原。在該過程中,抗體只能與固相載體結(jié)合,因此被稱為“間接”ELISA。
二、應用范圍
直接ELISA適用于檢測可溶性抗原,而間接ELISA則適用于檢測細胞表面抗原、包被在顆粒性抗原或半抗原上的抗原等。
三、靈敏度
直接ELISA的靈敏度通常比間接ELISA高,因為直接ELISA中抗原可以與固定在固相載體上的抗體和酶標記的二抗分別結(jié)合,而間接ELISA中抗原只能與固定在固相載體上的抗體結(jié)合。
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