今天，我們來聊聊PCR實驗中很關鍵的要素——耗材。作為PCR常客，了解PCR耗材相關的特性和術語是有必要的。
市面上的PCR耗材有很多，各種品牌、規格、顏色等，讓人眼花繚亂。我們來慢慢認識它。材質PCR耗材的原材料通常是聚丙烯。它是一種很好的耐熱惰性物質（使用溫度范圍為-30～140℃），能夠承受PCR反應熱循環過程中的熱能變化，很好地封閉和保護PCR反應體系中的物質。
顏色常見的有白管和透明管。在傳統PCR實驗中，兩者沒有區別。但是，在相同的熒光定量/qPCR實驗中，對于頂端信號讀取的qPCR儀器（在管的上方采集熒光信號）來說，白管的靈敏度和一致性相對更高（下圖A和B）。這是為什么呢？
與透明管相比，A 白管得到的Ct值更低；B 白管得到的重復性更好
qPCR的核心數據是Ct值，而熒光信號是Ct值計算的數據來源，所以管內的熒光能否完好地傳遞至檢測器是至關重要的。白色的管壁能夠阻止熒光穿過管壁和折射（下圖A），進而防止熒光傳至加熱模塊（放管子的金屬孔壁），被模塊吸收或發生不一致反射等情況。相比于透明管，在白管的頂端能夠采集到更強，更聚焦的熒光信號（下圖B）。
A 透明管和白管中熒光信號走向；B 分別加入等量熒光素后，熒光強度對比
So，假如你正在使用的是頂讀qPCR儀，那么安利一下，不妨用白管試試哦~
- 質量（是否干凈）這里強調一下耗材質量的重要性。qPCR耗材必須保證沒有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細菌和DNA酶，但不能去除灰塵和DNA殘留，它們可能會抑制PCR反應或產生非特異性擴增。物質是具有吸光度的，即便是很小的污染物也會吸收反應體系中的熒光，影響熒光信號的采集。用一個夸張版的實驗來演示一下雜質污染對實驗的影響，如下圖所示，在八聯排的一個反應孔中放入一粒雜質，不出所料，擴增結果曲線出現了顯著的異常。
- ↑ 8復孔重復性反應結果，左邊孔中的雜質讓曲線“跑偏”
Tips 注意不要讓耗材長期暴露在空氣中，取出耗材后，一定要快速封好包裝袋，避免用裸手接觸。有條件的話，可在超凈臺中操作。容量/尺寸/通量
容量決定了可加樣的多少（反應體積）。加樣過多會導致熱傳導效率下降，溢出或交叉污染；而加樣不足會引起樣品蒸發損耗。qPCR儀的加熱模塊也會決定可適配的耗材和適用的反應體系大小。通量很容易理解，就是單次實驗能上多少個樣品。常見的容量和通量規格如下表所示：
單管/八聯排 | 0.2mL、0.1mL |
96孔板 | 0.2mL、0.1mL |
384孔板 | 0.02mL |
容量規格也常用標準和低容量來區分，如下圖所示。low profile（低容）耗材的高度更低，這種短小的設計減少了反應體系上方的空間（“死體積”——無用部分），降低熱循環過程中的蒸發影響，同時能夠讓加熱模塊更大程度地將其包裹，提高熱傳導效率。因此，低容管也被稱為“快速”管或板。
Tips 常見的反應體積一般為20 µL，推薦使用0.1 mL或low profile的低容反應管。管壁厚度PCR耗材的管壁厚度要均一，才能提供一致的熱傳導。超薄管壁較標準版薄50%，可進一步減少熱屏障，帶來更快更好的反應效果。當然，建議選超薄的。
透明度qPCR的管蓋和封膜需要具有很高的光學透性，確保的熒光信號的穿透和傳遞，減少失真（針對頂讀qPCR儀）。管壁的透明度越高反倒會影響實驗結果，理由在前面解釋過。傳統PCR可忽略此特點。裙邊PCR板的裙邊指的是板的周圍延伸部分。額.......這個裙邊作用是在構建反應體系時為移液過程提供穩定性支撐，以及結合自動化工作站時提供機械強度和抓手。常見的有三種：無裙邊、半裙邊和全裙邊（對應下圖A、B、C）。
Tips 簡單理解就是，裙邊的意義更多在于為工業化、自動化批量處理提供便利，與機械臂的結合。在常規科研實驗室中可能不太需要，使用無裙邊板即可。
封板膜
PCR封板膜由透明塑料或鋁箔制成。黏性透明薄膜比較常見，適配于96或384孔板，要有足夠好的光透性。可以在封膜時用個小卡片把孔周圍的膜壓緊，避免漏氣等現象。實驗室里的貼膜boy們應該很熟悉了吧。可以簡單理解為......
黏性鋁膜可能比較少見，盡管不適合qPCR，但對于光敏樣品還是合適的耗材，由于可以穿刺，便于PCR中樣品轉移。（適用于傳統PCR）
總結
耗材作為PCR體系的載體，對提高實驗數據質量是非常重要的。希望本分享能夠讓你了解PCR耗材的一些小知識，為更好地選擇耗材提供幫助。ok，就到這兒了，下回見咯~
